一、標準基本信息

• 標準編號：GB/T 18204.3-2025

• 發(fā)布日期：2025-05-30

• 實施日期：2025-12-01

• 發(fā)布單位：國家市場監(jiān)督管理總局、國家標準化管理委員會

• 歸口單位：國家疾病預(yù)防控制局

• 代替標準：GB/T 18204.3-2013《公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分：空氣微生物》

• 適用范圍：適用于公共場所中空氣微生物指標（細菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈球菌和嗜肺軍團菌）的測定，其他場所參照執(zhí)行

二、沉降菌檢測基本原理

自然沉降法基于地心引力原理，讓空氣中攜帶微生物的氣溶膠粒子垂直自然沉降到瓊脂培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后計數(shù)形成的菌落數(shù)，以此評估空氣中微生物污染程度。該方法操作簡便，但采集效率相對較低，穩(wěn)定性稍差，適合基層實驗室和現(xiàn)場快速篩查。

三、檢測指標與適用方法

四、沉降菌檢測詳細操作流程

1. 采樣前準備

（1）儀器設(shè)備準備

• 培養(yǎng)皿：φ90mm無菌平皿，面積約63.6cm2

• 培養(yǎng)基：

• 細菌總數(shù)：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

• 真菌總數(shù)：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）

• 輔助設(shè)備：無菌鑷子、酒精燈、溫濕度計、記錄表格、采樣標識等

• 質(zhì)量控制：所有器具需經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121℃，15-20分鐘），培養(yǎng)基需進行無菌試驗

（2）現(xiàn)場準備

• 采樣前關(guān)閉門窗1小時，保持室內(nèi)穩(wěn)定狀態(tài)

• 記錄現(xiàn)場溫度、濕度、氣壓等環(huán)境參數(shù)

• 采樣點避開通風(fēng)口、門窗邊緣和人員頻繁活動區(qū)域

2. 采樣操作

（1）布點原則

（2）采樣參數(shù)

• 采樣高度：距地面0.8-1.5m（人體呼吸帶高度）

• 暴露時間：30分鐘（允許±5分鐘浮動）

• 操作步驟：

• 用無菌鑷子打開平皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露于空氣中

• 平皿蓋需反扣在平皿旁，避免污染

• 暴露結(jié)束后，立即蓋上平皿蓋，做好標識（編號、地點、時間）

• 空白對照：每批采樣設(shè)置1個空白樣，不暴露于空氣中，與樣品同條件培養(yǎng)

3. 樣品運輸與保存

• 采樣后4小時內(nèi)送至實驗室，若無法及時送達，需置于4℃冷藏保存，保存時間不超過24小時

• 運輸過程中避免劇烈震動和溫度變化

4. 培養(yǎng)與計數(shù)

（1）培養(yǎng)條件

（2）菌落計數(shù)

• 培養(yǎng)結(jié)束后，在菌落計數(shù)器或放大鏡下計數(shù)平板上的菌落數(shù)

• 計數(shù)原則：

• 細菌：計數(shù)所有肉眼可見的菌落，包括不同形態(tài)、顏色的菌落

• 真菌：計數(shù)所有酵母菌落和霉菌菌落，注意區(qū)分真菌與細菌菌落

• 菌落重疊時，若能明確區(qū)分，可分別計數(shù)；無法區(qū)分時，按1個菌落計

• 空白對照平板不得有菌落生長，否則本次采樣結(jié)果無效

5. 結(jié)果計算與報告

（1）計算公式

采用奧梅梁斯基公式計算空氣中微生物濃度：

菌落總數(shù)（CFU/m3）= 50000 × N ÷ (A × T)

• N：平均菌落數(shù)（所有采樣點菌落數(shù)的平均值）

• A：平皿面積（cm2），φ90mm平皿約為63.6cm2

• T：暴露時間（分鐘），標準為30分鐘

（2）結(jié)果報告

• 以CFU/m3為單位報告結(jié)果

• 保留整數(shù)，若菌落數(shù)為0，報告為"<1"CFU/m3

• 同時報告采樣條件（溫度、濕度、采樣時間、布點方式等）

五、質(zhì)量控制要求

1. 空白對照：每批樣品設(shè)置1個空白樣，檢驗培養(yǎng)基和操作過程的無菌性

2. 平行樣：每10個樣品至少設(shè)置1個平行樣，平行樣相對偏差應(yīng)≤20%

3. 人員操作：采樣人員需經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)，嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范

4. 儀器校準：定期校準培養(yǎng)箱溫度，確保溫度精度符合要求

5. 記錄完整：詳細記錄采樣時間、地點、環(huán)境參數(shù)、操作過程等信息，確保可追溯性

六、與2013版標準的主要區(qū)別

七、注意事項與常見問題

1. 采樣高度：必須在0.8-1.5m范圍內(nèi)，避免過高或過低影響結(jié)果代表性

2. 暴露時間：嚴格控制在30分鐘，避免時間過長或過短導(dǎo)致結(jié)果偏差

3. 菌落計數(shù)：真菌培養(yǎng)需5-7天，不可提前計數(shù)，避免遺漏緩慢生長的真菌

4. 結(jié)果解釋：自然沉降法結(jié)果僅作參考，如需精確測量，建議采用撞擊法

5. 安全防護：采樣和培養(yǎng)過程中注意生物安全，避免交叉污染和人員感染

八、應(yīng)用場景

商場、超市、酒店、餐廳等公共場所日常衛(wèi)生監(jiān)測

醫(yī)院候診區(qū)、學(xué)校教室、辦公室等人員密集場所健康風(fēng)險評估

公共交通工具（地鐵、公交、高鐵）空氣質(zhì)量監(jiān)測

室內(nèi)裝修后空氣質(zhì)量驗收（配合其他指標）